SuperQuickRT cDNA第--鏈合成試劑盒說明書
SuperQuickRT cDNA Kit
（For Real-time PCR）
SuperQuickRT cDNA第--鏈合成試劑盒
（For Real-time PCR）
目錄號：K2381
保存條件：-20℃。
規(guī)格說明
Cat. No. K2381B K2381
Kit Size 25 100
SuperQuickRT Mix 12.5 μl 50 μl
5×RT Buffer（For Real-time PCR） 55 μl 220 μl
Primer Mix 27.5 μl 110 μl
dNTP Mix (2.5 mM Each) 55 μl 220 μl
RNase-Free Water 1 ml 1 ml
本產(chǎn)品僅供科研使用，請勿用于臨床診斷及其他用途
產(chǎn)品簡介
本產(chǎn)品是為Real-time RT-PCR研發(fā)的快速逆轉(zhuǎn)錄試劑，其包含從RNA模板逆轉(zhuǎn)錄
成cDNA第--鏈所需的全部試劑，優(yōu)化的反應(yīng)體系為快速逆轉(zhuǎn)錄酶提供更可靠的反應(yīng)條
件。SuperQuickRT逆轉(zhuǎn)酶逆轉(zhuǎn)錄效率高，可對少量RNA模板進行良好的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，
15分鐘即可完成熒光定量 PCR模板cDNA第--鏈合成。另外，逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)溫度可以提
高到50 ºC，可通讀GC含量高和二級結(jié)構(gòu)復(fù)雜的RNA模板。
產(chǎn)品特點
1．快速：42 ºC，15min可完成cDNA第--鏈合成。
2．反轉(zhuǎn)錄效率高：反轉(zhuǎn)錄效率高于90%。
3．靈敏度高：pg級模板也可以得到高質(zhì)量的cDNA。
4．通讀復(fù)雜模板：GC含量高和二級結(jié)構(gòu)復(fù)雜模板。
注意事項
1．在操作過程中應(yīng)避免RNase污染，防止RNA降解或?qū)嶒炛械慕徊嫖廴?，建議操作人
員帶口罩和一次性手套并經(jīng)常更換手套，使用專門的儀器和耗材。
2．逆轉(zhuǎn)錄體系配制在冰上進行操作，防止RNA發(fā)生降解。試劑盒的酶使用后盡快置于
-20 ºC保存，并盡量避免反復(fù)凍融。
3．Primer Mix是由Oligo(dT)和random primer配制而成，也可根據(jù)實驗需要選用Oligo-dT
Primer或Gene Specific Primer。
4．反應(yīng)體系可倍比放大，10 μl反應(yīng)體系可zui大使用1μg總RNA。
5．對于二級結(jié)構(gòu)復(fù)雜的RNA模板，建議在操作步驟之前，將模板RNA在65℃孵育5min立刻置于冰上，短暫離心后進行下一步操作。
操作步驟
1．將模板RNA在冰上解凍；將試劑盒組分在室溫解凍后立刻置于冰上，使用前將每種
溶液渦旋振蕩混勻，并經(jīng)短暫離心后使用。
2．根據(jù)以下表格配制反應(yīng)體系，渦旋震蕩混勻，短暫離心，使管壁上的溶液收集到管底。
試劑 10 μl反應(yīng)體系 終濃度
dNTP Mix (2.5 mM Each) 2 μl 500 μM Each
Primer Mix 1 μl
1）
RNA Template X μl 10 pg～1 µg2）
5×RT Buffer（for Real-time PCR） 2 μl 1×
SuperQuickRT Mix 0.5 μl
RNase-Free Water up to 10 μl
注意：1）根據(jù)實驗需要可使用Oligo-dT Primer或Gene Specific Primer，建議10 μl 反應(yīng)體系加入Oligo-dT Primer 25 pmol，或Gene Specific Primer 2.5 pmol 。
2）如果總RNA量大于1 µg，請按比例擴大反應(yīng)體系。
3．42℃孵育15分鐘。
注意：對于二級結(jié)構(gòu)復(fù)雜或GC含量高的模板，可以提高逆轉(zhuǎn)錄溫度至50℃，增強逆轉(zhuǎn)錄效率。
4．85℃孵育5分鐘，使逆轉(zhuǎn)錄酶失活。
5．短暫離心后置于冰上，再進行后續(xù)Real-time PCR檢測，如果需要長時間保存，請置于-20℃。
注意：進行Real-time PCR反應(yīng)時，逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的加量應(yīng)不超過PCR反應(yīng)總體積的1/10。
相關(guān)產(chǎn)品信息
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