Tricine-SDS-PAGE凝膠制備試劑盒說明書
Tricine-SDS-PAGE Gel Kit
Tricine-SDS-PAGE凝膠制備試劑盒
目錄號(hào):K2384
組分說明及保存條件
Cat. No. K2384
保存條件
Size 約 50塊膠
49.5%T 3%C 30 ml 2-8ºC
49.5%T 6%C 100 ml 2-8ºC
凝膠緩沖液 140 ml 2-8ºC
甘油 30 ml 室溫
APS 0.5 g 室溫
TEMED 750 ul 室溫,避光
本產(chǎn)品所提供的 APS(過硫酸銨)為固體粉末,使用前加入雙蒸水溶解即配制成10%APS溶液(0.5 g APS加5 ml雙蒸水),將溶液分裝后置于-20℃保存,通常半年內(nèi)有效。溶液在使用中可放置4℃保存兩周。
本產(chǎn)品僅供科研使用,請(qǐng)勿用于臨床診斷及其他用途
產(chǎn)品簡介
常規(guī)的Tris-SDS-PAGE電泳的只能分辨大分子蛋白,對(duì)于相對(duì)分子量小的,尤其
是10 kD以下的蛋白分辨率極低。而Tricine-SDS-PAGE可以很好的分離分子量在1-10 kD
的蛋白及多肽,成為目前電泳法變性分離多肽的主要方法。本產(chǎn)品包括Tricine-SDS-
PAGE凝膠制備所需全套試劑,只需自備蒸餾水,即可制備高質(zhì)量各種濃度的凝膠,方
便、快捷,電泳后可直接用于考染、銀染、Western雜交等實(shí)驗(yàn)。
注意事項(xiàng)
1. 10%APS配制后分裝-20度保存。APS溶液不穩(wěn)定,應(yīng)盡量減少室溫存放時(shí)間,每
次取用后立即放回冰箱,以防失效;若發(fā)現(xiàn)凝膠聚合時(shí)間延長,應(yīng)考慮更換,使用
-20度保存的10%APS。
2.在凝膠配制過程中,尤其是液體混勻步驟,應(yīng)盡量避免氣泡的產(chǎn)生。
3.在分離膠上層加蒸餾水時(shí)要小心操作,加水時(shí)速度不能太快。
4.丙烯酰胺具有神經(jīng)毒性,操作時(shí)請(qǐng)穿著實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套。
5.本產(chǎn)品僅用于科研,不能用于人體實(shí)驗(yàn)或人體治療。
操作步驟
根據(jù)目的蛋白分子量大小選擇合適的PAGE分離膠配制濃度,凝膠濃度配方參考附表。
I 配制分離膠
1.將不同體積的雙蒸水、49.5%T 6%C、凝膠緩沖液和甘油加入到離心管中混合。
2.加入10%APS和TEMED,立即渦旋混勻5-10秒,以使溶液充分混勻。
3.在凝膠模具中迅速灌入適量分離膠溶液(1 mm mini-gel,分離膠溶液加約4 ml),
然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-3 cm的水層,使凝膠表面保持平整。
4.靜置,待分離膠和水層之間出現(xiàn)一個(gè)清晰的界面表示凝膠已聚合。
II 配制夾層膠
去除覆蓋在分離膠上的水層,用濾紙將殘留的水盡量吸去。
1.將不同體積的雙蒸水、49.5%T 3%C和凝膠緩沖液加入到離心管中混合。
2.加入10%過硫酸銨和TEMED,立即渦旋混勻5-10秒,以使溶液充分混勻。
3.將適量的夾層膠溶液迅速加至分離膠的上面(對(duì)于1 mm的mini-gel,夾層膠溶液加
約1 ml ),然后在夾層膠溶液上輕輕覆蓋一層水層,使凝膠表面保持平整。
4.靜置,待夾層膠和水層之間出現(xiàn)一個(gè)清晰的界面表示凝膠已聚合。
III 配制濃縮膠
去除覆蓋在夾層膠上的水層,用濾紙將殘留的水吸去。
1.將不同體積的雙蒸水、49.5%T 3%C和凝膠緩沖液加入到離心管中混合。
2.加入10%過硫酸銨和TEMED,立即渦旋混勻5-10秒,以使溶液充分混勻。
3.將梳子插入凝膠內(nèi),避免產(chǎn)生氣泡。
4.待凝膠聚合后,小心地拔出梳子,以免破壞加樣孔。
5.進(jìn)行電泳操作。
IV 電泳
將電泳槽放入4℃或冰水浴中,外槽加入陽極緩沖液(K2388),內(nèi)槽加入陰極緩沖液(K2387),30V預(yù)電泳10 min,將樣品(已經(jīng)過Tricine上樣緩沖液YJ2385處理)加入點(diǎn)樣孔后30V電泳1小時(shí),100V電泳至溴酚藍(lán)到達(dá)膠底部后停止電泳,進(jìn)行后續(xù)的考馬斯亮藍(lán)染色或電轉(zhuǎn)。
實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):
實(shí)驗(yàn)室代做實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目
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| 染色質(zhì)免疫沉淀分析(CLIP)實(shí)驗(yàn)服務(wù)
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