尿素氮(BUN)試劑盒說明書
注意:正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義
尿素是生物體內(nèi)含氮化合物分解的終產(chǎn)物,在尿酶催化下分解轉(zhuǎn)化成氨。血液尿素氮是腎功能的主要指標(biāo)之一。
測定原理
在堿性條件下,尿酶水解尿素產(chǎn)生氨,氨與次氯酸反應(yīng)生成氯胺,再與酚衍生物作用生成綠色吲哚酚,在 630nm 處有特征吸收峰。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器
天平、研缽、常溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。
試劑組成和配制
標(biāo)準(zhǔn)品:液體 1mL×1 支,4℃保存。
試劑一:粉劑×1 瓶,4℃避光保存,臨用前加 4mL 蒸餾水充分溶解。
試劑二:液體 8mL×1 瓶,4℃避光保存。
試劑三:液體 8mL×1 瓶,4℃避光保存。
樣品處理
1. 組織:按照質(zhì)量(g):蒸餾水體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL蒸餾水)加入蒸餾水,勻漿后于25℃,10000g 離心10min,取上清待測。
2. 細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104個):蒸餾水體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL蒸餾水),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min); 然后 4℃,10000g離心10min,取上清置于冰上待測。
3. 血清或其它液體:直接檢測。
測定操作
| 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 測定管 |
樣品(μL) |
|
| 20 |
標(biāo)準(zhǔn)品(μL) |
| 20 |
|
H 2 O(μL) | 20 |
|
|
試劑一(μL) | 40 | 40 | 40 |
充分混勻,于 37℃反應(yīng) 10min | |||
試劑二(mL) | 70 | 70 | 70 |
試劑三(mL) | 70 | 70 | 70 |
充分混勻,于37℃顯色10min,于微量石英比色皿/96孔板,雙蒸水調(diào)零,測定630nm處吸光值, 記為A空白管、A標(biāo)準(zhǔn)管和A測定管 |
注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次
計(jì)算公式
1. 按樣本質(zhì)量計(jì)算
尿素氮含量(mg/g)=(A測定管- A空白管) ÷(A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)×C 標(biāo)準(zhǔn)品÷W= 0.005×(A測定管- A空白管) ÷(A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)÷W
2. 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
尿素氮含量(mg/104cell)=(A測定管- A空白管) ÷(A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)×C標(biāo)準(zhǔn)品÷細(xì)胞數(shù)量= 0.005×(A測定管- A空白管) ÷(A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)÷細(xì)胞數(shù)量
3. 按液體體積計(jì)算
尿素氮含量(mg/L)=(A測定管- A空白管) ÷(A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)×C 標(biāo)準(zhǔn)品=5×(A測定管- A空白管) ÷(A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)
C 標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品濃度,5mg/L;W:樣品質(zhì)量,g
注意事項(xiàng)
1. 配制好的試劑一在2-8℃條件下可保存一周。
2. 最di檢出限為80μg/L。
實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):
實(shí)驗(yàn)室代做實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目
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| 染色質(zhì)免疫沉淀分析(CLIP)實(shí)驗(yàn)服務(wù)
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