血液基因組柱式中量提取試劑盒（1-5 ml）說明書

BloodGen Midi Kit

目錄號：K0541

運輸條件：室溫（15-25℃）。

保存條件：Buffer RBL  4℃，其他組分室溫（15-25℃）保存。

組分說明

                   Cat. No.                       K0541

                   Size                              50

                   Buffer RBL                    3×250 ml

                   Buffer GR                       25 ml

                   Buffer GL                       25 ml

                   Buffer GW1（concentrate）         13 ml

                   Buffer GW2（concentrate）         15 ml

                   Buffer GE                       15 ml

                   Proteinase K                    50 mg

                   Proteinase K Storage Buffer      5 ml

                   Spin Column DL                    50

                   Collection Tube                   50

              本產(chǎn)品僅供科研使用，請勿用于臨床診斷及其他用途  

產(chǎn)品簡介

　　本試劑盒適用于從新鮮或冷凍全血（用檸檬酸鹽、EDTA或肝素等抗凝劑處理過的

血液樣品）、血漿、血清、血沉棕黃層、骨髓、無細胞體液等樣本中提取總DNA，包

括基因組DNA，線粒體DNA及病毒DNA。本品可以處理1-5 ml的全血，可純化獲得大小

為100 bp到50 kb的DNA，純化的DNA產(chǎn)量高、質(zhì)量好，最大限度去除蛋白、色素、脂

類及其他抑制性雜質(zhì)污染，可直接用于 PCR、熒光定量PCR、酶切和Southern  Blot等

實驗。

產(chǎn)品特點

·柱式提取方法，適用于處理1-5 ml的血液基因組提取。

自備試劑：無水乙醇。

實驗前準備及重要注意事項

1．向Proteinase K中加入5 ml  Proteinase K Storage  Buffer使其溶解，-20℃保存。配

   制好的Proteinase K勿長時間室溫放置，避免反復凍融，以免影響其活性。

2．樣品應(yīng)避免反復凍融，否則會導致提取的DNA的片段較小且提取量下降。

3．本試劑盒最多可以提取1-5 ml全血樣品，如需提取大量血液樣本請選用血液基因組大

   量提取試劑盒（#K0544）。

4．第--次使用前應(yīng)按試劑瓶標簽說明先在Buffer GW1和Buffer GW2中加入無水乙醇。

5．使用前請檢查Buffer GL是否出現(xiàn)結(jié)晶或者沉淀，如有結(jié)晶或者沉淀，請置于56℃水

   浴重新溶解。

6．如下游實驗對RNA污染較敏感，可加入4 μl DNase Free的RNase A（100 mg/ml），

   RNase A本試劑盒并未提供，如需要可單獨向本公司訂購，貨號：K0601。

7．試劑盒中的Buffer RBL渾濁后不能繼續(xù)使用。

操作步驟

1．向離心管（自備）中加入1-5 ml血液樣品，加入3倍體積的Buffer RBL輕輕渦旋或顛

   倒混勻。

2．3000 rpm離心10分鐘，小心吸棄上清。

3．向沉淀中加入400 μl Buffer GR，重懸沉淀。

   注意：如果下游試驗對RNA敏感，可加入4 μl  RNaseA（100mg/ml）溶液，震蕩15秒，室溫放置5分鐘。

4．1-2ml血液樣本提取時,向以上溶液中加入40 μl  Proteinase K，混勻；2-5ml血液樣

   本提取時,向以上溶液中加入100 μl Proteinase K，混勻。

5．加入400 μl Buffer GL，顛倒混勻15次，劇烈渦旋震蕩至少1分鐘。

   注意：不要直接將Proteinase K直接加入到Buffer GL。

6．70℃孵育10分鐘，其間顛倒混勻數(shù)次。

   注意：1）如溶液未*清亮，補加適量Proteinase K，孵育。延長孵育時間至溶液*清亮為止。

   2）孵育10分鐘DNA的產(chǎn)量已經(jīng)達到最大，繼續(xù)延長孵育時間對DNA產(chǎn)量和純度沒有影響。

7．加入400 μl無水乙醇，顛倒混勻10次。短暫離心，使管壁和管蓋上液體集中到管底。

8．將上步所得到的溶液全部加入到已裝入收集管（ Collection Tube）的吸附柱（Spin

   Column DL）中，若一次不能加完溶液，可分多次轉(zhuǎn)入。10,000 rpm（～8,000 x g）

   離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

9．向吸附柱中加入500 μl Buffer GW1（使用前檢查是否加入無水乙醇），10,000 rpm

   離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

   注意：如果提取樣品是小鼠或猴子等血紅素難以除去的種屬的血液基因組，建議重復步驟9。

10.向吸附柱中加入500 μl Buffer GW2（使用前檢查是否加入無水乙醇），10,000 rpm

離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

   注意：如需進一步提高DNA純度，可重復步驟10。

11.10,000 rpm離心2分鐘，倒掉收集管中的廢液。將吸附柱置于室溫數(shù)分鐘，以*晾干。

   注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除，乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶促反應(yīng)（酶切、PCR等）。

     12.將吸附柱置于一個新的離心管中，向吸附柱中間部位懸空加入50-200 μl Buffer GE

或滅菌水，室溫下放置2-5分鐘，10,000 rpm離心1分鐘，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。

         注意：1）如果下游實驗對pH值或EDTA敏感，可以用滅菌水洗脫。洗脫液的pH值對洗脫效率有很大影響，若用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5（可以用NaOH將水的pH值調(diào)到此范圍），pH值低于7.0時洗脫效率不高。

2）離心之前室溫孵育5分鐘可以增加產(chǎn)量。

3）用另外的50-200 μl Buffer GE或滅菌水再次洗脫可以增加產(chǎn)量。

4）如果要提高DNA的終濃度，可以將步驟12所得的DNA洗脫液重新加至吸附膜上，10,000 rpm離心1min；若洗脫體積小于200 μl，可以增加DNA的終濃度，但可能會減少總產(chǎn)量。如果DNA的量小于1 μg，推薦用50 μl Buffer GE或滅菌水洗脫。

5）因為保存在水中的DNA會受到酸性水解作用的影響，如需長期保存，推薦用Buffer GE洗脫并于-20℃保存。

     相關(guān)產(chǎn)品信息

目錄號           產(chǎn)品名稱

K0688        Es Taq DNA polymerase (with Mg   2+)

K2362        Es Taq DNA polymerase (with Mg   2+, 2.5mM dNTP)

K0690        2×Es Taq Master Mix (含染料)

K0655        2×GoldStar Best Master Mix (含染料)

K0957        UltraSYBR Mixture

K0659        UltraSYBR一步法熒光定量  PCR試劑盒

K0660        UltraSYBR一步法熒光定量  PCR試劑盒  (With ROX)

K0953        GoldStar Taqman Mixture (With ROX)

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