THP-1 人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞
Human Monocyte Leukemia Cells ,THP1
貨號:YJ-h213(STR鑒定)
價格: 1800.0
規(guī)格: 1*106
細(xì)胞介紹
該細(xì)胞對乳汁珠和激活的紅細(xì)胞有吞噬作用,無表面和胞質(zhì)免疫球蛋白。可以用佛波醇 TPA誘導(dǎo)單核細(xì)胞分化。
細(xì)胞特性
1) 來源:急性單核細(xì)胞白血病,單核細(xì)胞
2) 形態(tài):單核細(xì)胞,懸浮
3) 含量:>1x106 細(xì)胞數(shù)
4) 規(guī)格:T25瓶(15ml離心管)或者1mL凍存管包裝
5) 用途:僅供科研使用。
運輸和保存
干冰運輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。
(2)復(fù)蘇的存活細(xì)胞15mL離心管常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
細(xì)胞接收后的處理
1) 收到細(xì)胞后請勿拆除封口膜,75%酒精消毒擦拭瓶壁將15mL離心管置于37℃培養(yǎng)箱放置約1-2h,若發(fā)現(xiàn)離心管破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們。
2)請在細(xì)胞移入2個新的T25培養(yǎng)瓶后,在4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時給剛移入培養(yǎng)瓶的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備
1) 準(zhǔn)備RPMI-1640(推薦YJ-0002)培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;0.05 mM β-巰基乙醇(細(xì)胞培養(yǎng)級 推薦:YJ-8211);雙抗,1%。
2) 參考傳代比例:傳代時控制細(xì)胞密度在2-4 ×105cell / mL,并在細(xì)胞生長至8-10 ×105cell / mL時進(jìn)行傳代。
3) 參考換液頻率:傳代時換液
4) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
5) 凍存液:完全培養(yǎng)液95%,DMSO 5%(使用該凍存液后,按照我?guī)斓慕?jīng)驗復(fù)蘇存活率約50%,復(fù)蘇后需要額外培養(yǎng)7-10天才能恢復(fù)生長)
6) 【注意事項】:
該細(xì)胞為懸浮細(xì)胞,根據(jù)培養(yǎng)經(jīng)驗以及客戶的反饋,傳代時使用【半換液法】對細(xì)胞狀態(tài)較為有利,因此我?guī)旖ㄗh您使用【半換液法】進(jìn)行傳代。
1. 您在收到我們提供的用15mL離心管(充液為完全培養(yǎng)基)發(fā)貨的細(xì)胞后,請不要通過離心的方式收集細(xì)胞,可以先準(zhǔn)備兩個新的T25培養(yǎng)瓶,然后將細(xì)胞混合均勻后移入兩個新的T25培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加培養(yǎng)基到10ml。放入到37℃培養(yǎng)箱中。
2. thp-1懸浮細(xì)胞。該細(xì)胞在培養(yǎng)時更喜歡溫和處理,培養(yǎng)時盡量少對細(xì)胞進(jìn)行離心處理以此造成對細(xì)胞的傷害。換液時不要全培養(yǎng)基更換,建議您使用【半換液法】進(jìn)行傳代,添加細(xì)胞培養(yǎng)基以稀釋細(xì)胞至維持密度即可。
3. 細(xì)胞對血清質(zhì)量較為敏感,我?guī)旖ㄗh您使用進(jìn)口大品牌優(yōu)質(zhì)血清進(jìn)行培養(yǎng)。FBS不要滅活,如果細(xì)胞生長緩慢請嘗試使用其他FBS或暫時將FBS濃度增加到20%
4. 該細(xì)胞的培養(yǎng)液中需添加β-巰基乙醇(細(xì)胞培養(yǎng)級別),若不添加,可能會對細(xì)胞狀態(tài)造成影響。
β-巰基乙醇的穩(wěn)定性有限,不可將β-巰基乙醇添加到完全培養(yǎng)基中長期儲存,在每次傳代或液體添加時再添加β-巰基乙醇。
β-巰基乙醇(2-巰基乙醇)被添加到淋巴細(xì)胞或其他細(xì)胞培養(yǎng)物中,因為在培養(yǎng)基中使用的FBS中氨基酸半胱氨酸供不應(yīng)求,而胱氨酸則很多。有些細(xì)胞(例如T細(xì)胞)無法將半胱氨酸轉(zhuǎn)運到細(xì)胞質(zhì)中,必須將其轉(zhuǎn)化為半胱氨酸。β-巰基乙醇將胱氨酸還原為可被細(xì)胞轉(zhuǎn)運的形式,然后轉(zhuǎn)化為細(xì)胞生長所需的半胱氨酸。 β-巰基乙醇還是一種還原劑,可以分解培養(yǎng)中細(xì)胞產(chǎn)生的許多有毒代謝產(chǎn)物,從而改善細(xì)胞周圍的環(huán)境。
5. 該細(xì)胞對細(xì)胞密度較為敏感,培養(yǎng)、傳代時請注意保持細(xì)胞密度在合適的范圍(具體請參考細(xì)胞說明書)。
6 . 該細(xì)胞凍存后復(fù)蘇率較低,凍存時請酌情提高細(xì)胞量。
7 .通常情況下可以通過向正在生長的細(xì)胞中添加完全培養(yǎng)基來維持細(xì)胞的生長,每7天可以將細(xì)胞離心并重懸于新配的培養(yǎng)基中,來完成細(xì)胞的全換液。
(頻繁的細(xì)胞計數(shù)是監(jiān)測thp-1的最佳方法。這些細(xì)胞應(yīng)該每2至3天通過向燒瓶中簡單加入少量新鮮培養(yǎng)基(使它們具有條件培養(yǎng)基)來培養(yǎng)。您不需要每次都離心細(xì)胞并重新傳代。當(dāng)在我們的實驗室中培養(yǎng)時,到第2天,細(xì)胞通??梢詳U(kuò)增到具有更多培養(yǎng)基的更大的燒瓶中。當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到8×10 5個活細(xì)胞/ ml時需要進(jìn)行傳代。不允許細(xì)胞密度超過1×10(6)活細(xì)胞/ ml。)
二. 細(xì)胞處理:
1) 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞換液: 通常情況下可以通過向正在生長的細(xì)胞中添加完全培養(yǎng)基來維持細(xì)胞的生長,每7天可以將細(xì)胞離心并重懸于新配的培養(yǎng)基中,來完成細(xì)胞的全換液。
3) 細(xì)胞傳代:傳代時控制細(xì)胞密度在2-4 ×105cell / mL,并在細(xì)胞生長至8-10 ×105cell / mL時進(jìn)行傳代。
4) 細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。
1,細(xì)胞凍存時,取上清,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2,4min ,1000rpm 離心去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入凍存液,輕輕混勻,DMSO終濃度為5%,細(xì)胞密度2x106/支,每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液,注意凍存管做好標(biāo)識。
注意事項
1.收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。
2.收到細(xì)胞先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(視細(xì)胞密度而定)穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收細(xì)胞時就整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài),100*,200*各一張),觀察記錄細(xì)胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)。
3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?,故本公司只保證客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài),故客戶需要售后時需出示收到細(xì)胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時間證明,期間間隔時間不能大于7天。
4.所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
從2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實驗技術(shù)及論文潤色服務(wù),協(xié)助客戶各類實驗服務(wù)及論文潤色十多年,是您值得信賴的科研合作伙伴!
如果您受時間、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。
實驗技術(shù)服務(wù):
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