間充質(zhì)干細(xì)胞成脂誘導(dǎo)分化試劑盒
,成脂誘導(dǎo)液
貨號(hào):YJ-MSCYD-004
價(jià)格: 1780.0
規(guī)格: 200ml
產(chǎn)品描述
本產(chǎn)品為團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化的間充質(zhì)干細(xì)胞成脂誘導(dǎo)分化試劑盒,可增強(qiáng)間充質(zhì)干細(xì)胞向成脂細(xì)胞分化的能力。
本產(chǎn)品僅用于科研用途,不可用于診斷、治療、臨床、家庭及其他用途。
產(chǎn)品組成成分及保存
試劑名稱 | 體積 | 保存條件 | 有效期 |
地塞米松 | 200μL | -20℃ | 1 Year |
IBMX | 200μL | -20℃ | 1 Year |
羅格列酮 | 200μL | -20℃ | 1 Year |
胰島素 | 400μL | -20℃ | 1 Year |
谷氨酰胺 | 2mL | -20℃ | 1 Year |
雙抗 | 2mL | -20℃ | 1 Year |
胎牛血清 | 20mL | -20℃ | 1 Year |
基礎(chǔ)培養(yǎng)基 | 200mL | 2-8℃ | 1 Year |
油紅O貯存液 | 5mL | 2-8℃(避光) | 1 Year |
? 注意:
1.為保證產(chǎn)品的有效性,請(qǐng)避免反復(fù)凍融。
2.配制好的誘導(dǎo)培養(yǎng)基保存于2-8℃,有效期為2周,請(qǐng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)用量合理配制。
產(chǎn)品使用說明
1. 成脂誘導(dǎo)分化完全培養(yǎng)基的配制
①室溫條件下融化各因子及血清。各因子融化后,瞬時(shí)離心,使溶液集中于離心管底部。(注意:若因子或血清中有沉淀物,屬正?,F(xiàn)象,無須過濾,避免成分丟失。)
②根據(jù)實(shí)驗(yàn)用量,于無菌操作臺(tái)中配制誘導(dǎo)分化完全培養(yǎng)基,建議每次配制50mL,配制比例見下表:
試劑成分 | 配制比例 | 50mL配制體系 |
地塞米松 | 0.1% | 50μL |
IBMX | 0.1% | 50μL |
羅格列酮 | 0.1% | 50μL |
胰島素 | 0.2% | 100μL |
谷氨酰胺 | 1% | 500μL |
雙抗 | 1% | 500μL |
胎牛血清 | 10% | 5mL |
基礎(chǔ)培養(yǎng)基 | 補(bǔ)充至所需體積 | 補(bǔ)充至總體積為50mL |
2. 成脂誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)步驟
①建議取第3~5代、純度達(dá)90%以上、狀態(tài)良好的間充質(zhì)干細(xì)胞,將其消化下來,離心收集,使用間充質(zhì)干細(xì)胞完全培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞密度為1~5×10 5個(gè)cell/mL,均勻鋪于6孔板中,每孔2mL,置于37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
(注意:此處細(xì)胞密度及培養(yǎng)液體積以6孔板為例,若為其它培養(yǎng)器皿,請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整細(xì)胞密度及培養(yǎng)液體積。)
②待細(xì)胞匯合度達(dá)80%~100%時(shí),即可進(jìn)行誘導(dǎo)分化。
③小心吸棄細(xì)胞培養(yǎng)上清,沿孔壁緩慢加入提前配制好的誘導(dǎo)分化完全培養(yǎng)基,每孔2mL,置于37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
(注意:完全培養(yǎng)基加入細(xì)胞前需提前置于37℃預(yù)熱。)
③每2day換用新鮮的誘導(dǎo)分化完全培養(yǎng)基。換液時(shí),若細(xì)胞培養(yǎng)上清顏色變?yōu)槌吻宓狞S色,是由于細(xì)胞量較大,培養(yǎng)基消耗較快導(dǎo)致的,請(qǐng)及時(shí)調(diào)整為每日換液。
(注意:完全培養(yǎng)基加入前需提前置于37℃預(yù)熱。)
④細(xì)胞誘導(dǎo)3周后,即可進(jìn)行油紅O染色鑒定。
3. 油紅染色分析
①細(xì)胞誘導(dǎo)分化結(jié)束后,小心吸棄細(xì)胞培養(yǎng)上清,1×PBS潤(rùn)洗1~2次。每孔加入1mL細(xì)胞固定液(4%中性甲醛溶液等),室溫固定30 min。
②配制油紅O工作液:油紅O貯存液與蒸餾水按照3:2配制,(例:油紅O貯存液3mL,蒸餾水2mL),混勻。使用濾紙過濾,收集濾液,即為油紅O工作液。
(注意:成脂細(xì)胞內(nèi)的油滴極易脫落,操作時(shí)須謹(jǐn)慎。)
③細(xì)胞固定完成后,吸棄細(xì)胞固定液,1×PBS潤(rùn)洗2次。沿孔壁緩慢加入油紅O染色液,每孔1mL,室溫染色30min。
(注意:油紅O工作液底部可能會(huì)有沉淀,吸取時(shí)盡量不要觸及底部。若細(xì)胞染色后有沉淀,PBS洗去即可。)
④吸出染色液,PBS潤(rùn)洗,去掉浮色。顯微鏡下觀察細(xì)胞染色效果。細(xì)胞內(nèi)油滴著色,呈紅色。
(注意:油紅O工作液不可重復(fù)使用,不建議回收。)
質(zhì)量控制
無菌檢測(cè)(細(xì)菌、真菌和支原體檢測(cè))
pH測(cè)試
滲透壓檢測(cè)
內(nèi)毒素
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注意事項(xiàng)
僅限科研用。
培養(yǎng)體系中的一些組分是對(duì)人體健康有害的物質(zhì),請(qǐng)不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部;這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低,如有接觸,立即用自來水沖洗即可。
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實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù):
實(shí)驗(yàn)室代做實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目
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細(xì)胞熒光染料標(biāo)記檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
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染色質(zhì)免疫沉淀分析(CLIP)實(shí)驗(yàn)服務(wù)
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