土壤酸性轉(zhuǎn)化酶 (S-AI) 活性檢測試劑盒 |
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土壤酸性轉(zhuǎn)化酶 (S-AI) 活性檢測試劑盒 可見分光光度法 注意:正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。 規(guī)格:50T/24S 產(chǎn)品內(nèi)容: 試劑一:液體 100mL×1 瓶,4℃保存; 試劑二:粉劑×1 瓶,4℃保存;臨用前加入 25mL 試劑一充分溶解備用;用不完的試劑 4℃保存; 試劑三:液體 20mL×1 瓶,4℃保存。 標(biāo)準(zhǔn)品:粉劑×1 支,4℃保存,10mg 無水葡萄糖。臨用前加入 1mL 試劑一溶解,制備 10mg/mL 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液備用。 產(chǎn)品說明: S-AI 在 pH 為 4.5~5.0 (酸性) 條件下催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖,是土壤微生物蔗 糖代謝關(guān)鍵酶之一。 S-AI 催化蔗糖降解產(chǎn)生還原糖,進一步與 3,5-二硝基水楊酸反應(yīng),生成棕紅色氨基化合物, 在 540nm 有特征光吸收,在一定范圍內(nèi) 540nm 光吸收增加速率與 AI 活性成正比。 試驗中所需的儀器和試劑: 可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水、甲苯。 操作步驟: 一、樣品處理: 新鮮土樣自然風(fēng)干或 37℃烘箱風(fēng)干,過 30~50 目篩。 二、測定步驟及加樣表: 1 、分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min ,波長調(diào)至 540nm ,蒸餾水調(diào)零。 2 、標(biāo)準(zhǔn)液的稀釋:將 10mg/mL 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液用試劑一稀釋至 4 、3 、2 、1 、0.8 、0.6 mg/mL 的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。 3 、加樣表:
混勻,煮沸 10min 左右 (蓋緊,以防止水分流失) ,流水冷卻后充分混勻,540nm 處蒸餾水調(diào) 零,記錄各管吸光值A ,記為 A 測定管、A 對照管、A 標(biāo)準(zhǔn)管、A 空白管。計算ΔA=A 測定管-A 對照 管,ΔA 標(biāo)準(zhǔn)=A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管。 三、S-AI 活性計算: 1 、 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制: 以葡萄糖濃度為 x 軸,相應(yīng)的ΔA 標(biāo)準(zhǔn)為 y 軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到標(biāo)準(zhǔn)方程 y=kx+b;將ΔA 帶 入公式得到 x ( mg/mL) 2 、 S-AI 活性計算 單位定義:37℃每 g 土壤每天產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為一個酶活性單位。 S-AI (U/g) =x×V 酶促÷W÷T V 酶促:酶促反應(yīng)總體積,0.820mL;W:樣本鮮重,g;T:反應(yīng)時間:1/24d; 注意事項: 1 、如果加入試劑三,煮沸 10min 后有混濁物出現(xiàn),建議離心除去沉淀 (10000rpm ,2min ) ,取上 清測定吸光度; 2 、如果吸光值大于 1 ,可以將上清液再進行稀釋;若吸光值較小,可以減少上清液稀釋倍數(shù)。兩種 操作均要注意改變公式中的稀釋倍數(shù)。 第 2 頁 共 2 頁 本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用!請勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測等用途! 從2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實驗外包及論文潤色服務(wù),協(xié)助客戶各類實驗服務(wù)及論文潤色十多年,是您值得信賴的科研合作伙伴! 如果您受時間、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。
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