人抗腮腺管抗體(anti-parotid duct Ab)ELISA檢測試劑盒使用說明書 |
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詳細(xì)介紹 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
本試劑盒只能用于科學(xué)研究,不得用于醫(yī)學(xué)診斷 人(Human)抗腮腺管抗體(anti-parotid duct Ab) ELISA檢測試劑盒 使用說明書 檢測原理 試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被抗腮腺管抗原的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD 值),與CUTOFF值相比較,從而判定標(biāo)本中抗腮腺管抗體(anti-parotid duct Ab)的存在與否。 樣品收集、處理及保存方法 1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。 2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。 3. 細(xì)胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。 5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 自備物品 1. 酶標(biāo)儀(450nm) 2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3. 37℃恒溫箱 操作注意事項(xiàng) 1. 試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶,這屬于正?,F(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。 2. 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。 3. 預(yù)處理后的樣本無需稀釋,直接取50μL加樣即可。 4. 嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。 5. 所有液體組分使用前充分搖勻。 試劑盒組成
試劑的準(zhǔn)備 20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。 洗板方法 1. 手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。 2. 自動洗板機(jī):每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。 操作步驟 1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。 2. 設(shè)置陰、陽性對照孔和樣本孔,陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照各50μL; 3. 待測樣本孔加待測樣本50μL; 4. 隨后陰、陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。 5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。 6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。 7. 每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。 結(jié)果判斷 1. 試驗(yàn)有效性:陽性對照孔OD值平均值≥1.00; 陰性對照孔OD值平均值≤0.15。 2. 臨界值(Cut off)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15 3. 陰性判斷:樣品OD值<臨界值(Cut off),樣品為陰性 4. 陽性判斷:樣品OD值>臨界值(Cut off),樣品為陽性 試劑盒性能 1. 準(zhǔn)確性:陽性對照孔OD值平均值≥1.00;陰性對照孔OD值平均值≤0.15,說明試驗(yàn)結(jié)果有效。 2. 特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。 3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。 4. 貯藏:2-8℃,避光防潮保存。 5. 有效期:6個月 從2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)及論文潤色服務(wù),協(xié)助客戶各類實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤色十多年,是您值得信賴的科研合作伙伴! 如果您受時間、試驗(yàn)條件等限制而無法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。
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